中药复方制剂对猪繁殖与呼吸综合征病毒防治效果研究
（神农士抗瘟1号）是任连智博士与孙英峰博士的又一立作，它定会给人类健康带来福音，也会为五畜五禽带来福音。任博士尊古而不泥，他用老子的道教思想注释了（神农士抗瘟1号）。老子说：“无名天地之始，有名万物之母”。任博士认为：天下万物生于有，有生于母。当万物生长时，万物莫不尊道而贵德。善水利万物而不争，当万物生生不息。欣欣向荣的成长时，“也会有，长之育之”，“亭之毒之，养之覆之”！就是说：当万物虽然生于母，也要防止颠覆死之，而生于无。且不能离道而行。五畜兴旺靠大自然，而更要靠有生命的植物来相伴才能相生，对毒瘟才会有“克”的道理，任博士利用跨世纪远古时期复生的中草药，去克服远古时期根瘤的、峦埋的、冰山的、洋流的跨世纪的病毒、病瘟。正是一物降一物的道理。（神农士抗瘟1号）用的是有生命的植物，既安全又能一拨见效，将会是养猪人的福星。也是老子说的道法道非常道，天法地、地法天。道法自然、师出自然，岂不更于然天下，惠济天下吗？科技改变未来，成果优质今生。
任连智1，李文忠2，刘野2，杨婧2，程宁2，王凯月2，杨程2，孙英峰2*
（1.神农世纪生物医学工程研究（天津）有限公司，天津，300385 ；2.天津农学院动物科学与动物医学学院，天津，300384）
摘要：为探索中药复方制剂（神农士抗瘟1号）对猪繁殖与呼吸综合征（porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）的防治效果。选取25-28日龄健康断奶仔猪40头，随机分为4组，10头/组，分别为空白对照组（Negative Control）、攻毒对照组（Positive Control）及中药1组（2kg/t）、中药2组（4kg/t）组，其中中药1和中药2组分别于攻毒前7d饲喂中药，攻毒后连续饲喂14 d，每日观察临床症状打分及测定直肠体温，定期体重测量，实验结束进行病理剖检与肺脏病理组织切片观察评分。结果显示，相比空白对照组，连续7 d添加中药（2kg/t、4kg/t）后可显著提高仔猪日增重（P＜0.05）；相比攻毒对照组的存活率为80%，中药实验组可显著提高仔猪存活率至100%（P＜0.01），且于攻毒后8d临床症状减轻，体温恢复正常，肺脏未见明显肉样变，但可见肺泡间隔增厚并伴有轻度炎性细胞浸润，与攻毒对照组差异不显著（P＞0.05）；综上研究表明，中药复方制剂（神农士抗瘟1号）可显著提高日增重、有效改善PRRSV感染猪的临床症状及肺部病理变化。本研究为中药防治PRRS提供了试验依据。
猪繁殖与呼吸综合征（porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）引起的一种急性、高度接触性传染病，临床主要表现为母猪流产或死胎、木乃伊胎，断奶仔猪出现呼吸障碍，并伴随有间歇性肺炎，病死率较高[1]。1996年，该病首次在我国暴发并在全国范围内传播，给我国的养猪业带来了巨大的经济损失[2]。2014年以来我国相继报道PRRSV NADC30-like毒株，发病感染率呈现逐年増高趋势，且在流行过程中与不同亚型PRRSV发生重组，导致流行毒株基因呈现多样性，增加了该病防控的复杂性，严重影响我国生猪养殖业的健康发展[3]。
近年来，中药复方制剂在畜牧生产中的抗病毒作用越来越被人们所重视[4-5]。传统中医传统观点认为，复方用药以“君、臣、佐、使”为指导，药物与药物之间会产生相生、相侮、相乘、相克等相互作用，这几种作用发生相互制约和相互
作者简介：任连智（19-），男，天津人，博士主要从事：世纪中草药抗世纪病毒研究通讯作者：孙英峰（1979-），男。山东新泰人，博士，主要从事：动物疫病防控研究。
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催化，通过多种活性成分、多靶点、多环节（途径）调控动物机体的整体动态平衡，形成协同效应，发挥扶正法邪，治病防病的生物学功效[6-8]。本研究通过拌料饲喂方式，评估中药复方制剂（神农士抗瘟1号）对PRRSV的防治效果，为进一步的临床推广提供技术依据。
1 材料与方法
1.1 中药及试剂
中药复方制剂（神农士抗瘟1号）由神农世纪生物医学工程研究（天津）有限公司提供；基因2型PRRSV通用型RT-PCR引物由本实验室设计合成；PRRSV抗体ELISA X3试剂盒为IDEXX HerdCheck。
1.2 毒株
PRRSV高毒力毒株TJ2020由天津农学院动物科学与动物医学学院兽医实验室分离鉴定。按Reed-Muench法测得毒株的效价为105.0TCID50 /mL。
1.3 试验动物
选取25-28日龄健康仔猪40头，前腔静脉采取仔猪血液样本，且经基因2型PRRSV通用RT-PCR检测抗原和IDEXX PRRSV抗体检测均为阴性。实验动物饲养天津农学院西校区实验动物中心。
1.4方法
1.4.1试验分组及处理
将40头仔猪随机分为4组，每组10头。分别为空白对照组（Negative Control）、攻毒对照组（Positive Control）、中药1组（添加剂量：2kg/t）和中药2组（添加剂量：4kg/t）。其中中药组按照添加比例提前饲喂7d，然后除空白对照组外，其余所有实验仔猪用PRRSV-TJ2020株F9代培养物（105.0TCID50 /mL）攻毒，每头肌内注射2mL和滴鼻1mL。中药试验组继续按照比例饲喂中药，连续拌料饲喂14d。空白对照组和攻毒对照组饲喂正常商品仔猪料。
1.4.2 指标检测[9]
每日观察各组仔猪的临床反应（精神状态、采食状态、神经状态等），并记录临床表现，同时测定直肠体温；病死猪及时进行采血和剖检及采集病料样品；攻毒前7d及攻毒后第0d、第7d和14d测量各组仔猪体重；于攻毒后14d，剖检所有组仔猪，采集肺脏组织进行大体病变评分，然后取部分肺组织置福尔马林固定，进行组织切片与显微病理病变打分。
1.4.3 数据分析
采用Prism6.0和SARS 21. 0软件对试验数据统计与方差分析，每组10个重复，数据以平均值±标准差表示，P＜0.01表示差异极显著，P＜0.05表示差异显著，P＞0.05表示差异性不显著。
2 结果
2.1 临床症状
整个实验周期内，空白对照组仔猪体温正常，采食量正常，所有仔猪未见异常。攻毒对照组和中药组仔猪在攻毒后第2d开始，所有组仔猪陆续出现食欲下降，体温升高，第6d个别猪出现咳嗽、呼吸困难症状，体温上升到40.0-41.5℃，随着时间延长临床症状加重，精神沉郁，有的食欲废绝，攻毒对照组仔猪于第10d死亡2头；中药实验组和攻毒对照组相比，在攻毒后1-7d内的体温反应无显著差异（P>0.05），第12d所有组仔猪体温均恢复正常，呼吸困难症状消失，食欲也基本恢复正常（图1）；相比攻毒对照组仔猪的存活率为80%，中药实验组（2kg/t、4kg/t）均可显著提高仔猪存活率至100%（P＜0.01）（图2）。
图1 实验各组仔猪体温曲线图
图2实验各组仔猪存活率曲线图
2.2 体重指标
相比空白对照组（饲喂正常日粮），中药实验组（2kg/t、4kg/t）添加中药7 d后可显著提高仔猪日增重（P＜0.05）；在攻毒后第7d和14d，相比攻毒对照组，中药组（2kg/t、4kg/t）也可显著提高仔猪日增重（P＜0.05），且整个实验过程中药实验组（4kg/t）的日增重效果较佳（图3）。
图3实验各组仔猪体重指标柱状图
2.3病理剖检结果
对实验过程中出现的病死猪和攻毒后第14d的所有存活仔猪进行病理剖检。由于PRRSV感染病变主要表现在肺部组织，所以本次实验采集肺脏组织进行观察评价。相比空白对照组，攻毒对照组的仔猪肺脏出现明显的间质性肺炎，肺脏有大面积的肉样变（图4A）；中药实验组（2kg/t）仔猪肺脏可见少量肉样病变，肺脏表面有少量出血点（图4B）；中药实验组（4kg/t）仔猪肺脏未见大面积肉样病变（图4C），与攻毒对照组相比，肺脏大体病变评分差异显著（P＜0.05）（图4E）。空白对照组仔猪肺脏未见明显肉眼病变（图4D）。PRRSV感染猪群后，中药复方制剂（神农士抗瘟1号）能够使发病猪的病理变化明显减轻。
图4实验各组仔猪肺脏大体病变及评分柱状图
A. 攻毒对照组，B.中药实验组（2kg/t），C.中药实验组（4kg/t），D. 空白对照组
E. 肺脏大体病变评分柱状图
2. 4组织切片结果
实验结束后，将仔猪肺脏进行病理切片与打分。攻毒对照组的仔猪肺泡间隔、支气管周围、小叶间质等间质增宽，增宽的间质大量中淋巴细胞、巨噬细胞浸润（图5A）；中药实验组（2kg/t）仔猪的肺泡间隔增厚，出现数量不等炎性细胞浸润，少量出血（图5B）；中药实验组（4kg/t）的仔猪肺泡间隔增宽，轻度淤血，肺实质轻度炎性细胞浸润（图5C），与攻毒对照组相比，肺脏显微病变评分差异显著（P＜0.05）（图5E）；空白对照组的仔猪组织切片，肺脏组织结构清晰，肺泡间隔无明显增宽，血管无明显扩张、充血与水肿现象，未见明显的炎性细胞浸润（图5D）。由组织切片结果可见，中药组不同程度减轻了肺脏的病理变化，可恢复肺脏的功能。
图5实验各组仔猪肺脏显微病理病变及评分柱状图A.攻毒对照组，B.中药实验组（2kg/t），C.中药实验组（4kg/t），
讨论
中药复方制剂（神农士抗瘟1号）主要有姜黄、葫芦巴、黄芪等药材组成。姜黄具有保肝、利胆、抗菌、抗炎、抗肿瘤、降血脂、抗凝血和抑制血小板聚集等作用，对消化系统有保护作用[10]。葫芦巴具有抗肿瘤、降血压、降血糖、利尿、抗炎、强心等作用，抗生育与抗雄激素的作用[11]。黄芩具有降血压、利尿、降血脂、抗血小板聚集和抗凝、抗微生物、抗变态反应、保肝、保护肾损伤的作用，一定剂量促进免疫细胞增殖[12]。本复方制剂有清热解毒和补气化瘀功效，对多种病毒和细菌有抑制作用，有抑菌消炎功效，对于瘟症、败血症、痢疾、肺炎等属于火毒炽盛均可使用。
本研究中，添加中药7 d后可显著提高仔猪日增重（P＜0.05），相比攻毒对照组，添加中药（剂量2kg/t或4kg/t）均可显著提高仔猪存活率，这与清瘟败毒散、白虎汤中药复方制剂提高临床PRRSV存活率结果相似[13]。攻毒后8d临床症状减轻，体温恢复正常，食欲也基本恢复正常，添加中药减轻了PRRSV感染诱发的临床症状。添加中药组均未见大面积肉样变，肺脏表面仅有少量出血点或出血斑。添加剂量为2kg/t组的仔猪肺脏病理切片可见肺泡间隔增厚，轻度淤血，肺实质轻度炎性细胞浸润，添加剂量4kg/t组的仔猪肺脏病理切片可见肺泡间轻度炎性细胞浸润，中药复方制剂（神农士抗瘟1号）明显改变了发病猪的病理变化。
近年来研究表明，中药及中药提取物复方制剂能够通过直接或间接的方式干扰PRRSV病毒的复制，对病毒性疾病的治疗及预防有着特殊的积极作用，可以降低病毒感染后导致的严重的病毒血症[14]。中药具有毒副作用较小的优势，许多研究者对清热解表、解毒活血的中药黄芩、板蓝根、青蒿等抗PRRSV的效果进行了研究，与本复方制剂的用药机理基本相似[15]。本研究探究中药复方制剂（抗瘟1号）对PRRSV引起的病毒血症的治疗效果，为 PRRS的防治奠定基础。
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